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本制品是phi29 DNA聚合酶的改造体，并经多次纯化分离而得。在保留了phi29 DNA聚合酶的链置换、连续合成特性(>70kb)的基础上，提高了滚环扩增的反应温度，Modi-phi29 DNA聚合酶可在42℃条件下持续的进行DNA合成（而phi29 DNA聚合酶在此温度下活性很低）。Modi-phi29仍然具有很强的3'-5'外切酶校读功能，合成的DNA片段保真性高。Modi-phi29的外切酶活性较强，因此合成过程中引物需要3'端硫代修饰，以降低外切活性对引物的切割效应。

• 在NGS测序中，提升了高GC含量、回文结构等复杂模板的延伸能力，使NGS的覆盖度更均一，降低测序所需深度；
  
• 高温的反应条件，提升了基因组DNA的WGA产物的合成量，并可以进行变温扩增；
  
• 降低测序中Gap区域，提升单细胞测序的数据质量和完整度；
  
• 降低非特异性扩增产物；
  
• 提升MDA/RCA等实验的扩增性能和特异性。

Modi-phi29 DNA聚合酶具有超强链置换能力、连续合成能力、扩增的高保真性等特点。

Modi-phi29 DNA聚合酶可用于DNA恒温滚环扩增，需强链置换和DNA连续合成的反应，质粒快速复制，高保真快速复制等领域。

• 必要时可单独额外添加终浓度1mM DTT和0.2mg/mL BSA，可提高反应效率。
  
• 该酶的最佳反应温度为42℃（在30～42℃之间均有活性）。
  
• 65℃加热10分钟即可使该酶失活。
  
• 根据实验类型需要，调整dNTP的浓度100～500μM。
  
• 添加酵母无机焦磷酸酶可提高DNA产量。
  
• 反应引物3'端的硫代修饰可避免引物降解。

• 配制引物模板退火体系
  

  成分	用量
  10×phi29 Buffer	2μL
  dNTP Mixture (10mM each)	1.2μL
  模板DNA	0.1～40ng
  硫代修饰的Oligo	x μL
  ddH2O	至19μL

  • 在不同的实验类型中，Oligo根据实验需要自行选择。
• 引物和模板退火：体系配制完毕后，放置到PCR仪中，95℃ 3min，25℃ 3min。
  
• 退火完毕后，向退火产物中加入1μL Modi-phi29 DNA聚合酶，混合均匀。
  
• 扩增反应
  
  • 恒温扩增：
    对于环状DNA模板采用恒温反应作为推荐使用30℃恒温扩增，30℃孵育6~16h.该酶在30～42℃条件下均可工作，必要时根据实验类型进行调整。
    
  • 变温扩增：对于基因组DNA或cDNA模板，推荐使用变温扩增反应，以在短时间内获得更高产量，并提高了低浓度模板的扩增产量。在PCR仪上做如下设置：
    【30℃ 5min；42℃ 15s】循环72次（约6h）或120次（约10h）。
• 必要时，反应结束后，可于65℃加热10min进行失活反应。